в какую пробирку берут кровь на группу крови и резус фактор
Определение группы крови
В 1901 году выдающийся ученый Карл Ландштейнер открыл группы крови и заложил основы современной трансфузиологии. Исследователь выявил три группы на основании различных вариантов реакции агглютинации эритроцитов и сывороток крови. Материал для исследования был взят у сотрудников собственной лаборатории. Ученики Ландштейнера Декастелло и Стюрли несколькими годами позже открыли четвертую группу, но посчитали ее сомнительной и исключили из результатов исследований. В 1906 году психиатр из Праги Ян Янский подтвердил существование группы AB (IV). Публикация исследования в местном издании оказалась практически незамеченной. В 1910 году после повторного обнаружения четвертой группы Моссом Ян Янский был вынужден доказывать первенство открытия. Чешский ученый предложил цифровое обозначение групп крови: I, II, III, IV.
В трансфузиологии группами крови называют различные сочетания антигенов эритроцитов. Антигены являются генетическими признаками: наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении жизни. В 1980 году Международное сообщество переливания крови разработало числовую терминологию для антигенов эритроцитов. Выделены 23 системы группы крови, включающие 194 антигена. Нумерация в большинстве случаев соответствует порядку обнаружения. Входящие в каждую из 23 систем антигены кодируются шестизначным номером: первые три цифры являются номером системы, оставшиеся три – указывают на специфичность антигена внутри системы.
| № системы | Наименование | Обозначение | Наименование генов | Хромосомная локализация |
|---|---|---|---|---|
| 001 | AB0 | AB0 | AB0 | 9q34.1—q34.2 |
| 002 | MNS | MNS | GYPA, GYPB, GYPE | 4q28—q31 |
| 003 | P | P1 | P1 | 22q11.2—qter |
| 004 | Rh | RH | RHD, RHCE | 1p36.2—p34 |
| 005 | Lutheran | LU | LU | 19q12—q13 |
| 006 | Kell | KEL | KEL | 7q33 |
| 007 | Lewis | LE | FUT3 | 19p33 |
| 008 | Duffy | FY | FY | 1q22—q23 |
| 009 | Kidd | JK | JK | 18q11—q12 |
| 010 | Diego | DI | AE1 | 17q12—q21 |
| 011 | Yt | YT | ACHE | 7q22 |
| 012 | Xg | XG | XG | Xp22.32 |
| 013 | Scianna | SC | SC | 1p36.2—p22 |
| 014 | Dombrock | DO | DO | неизвестна |
| 015 | Colton | CO | AQP1 | 7p14 |
| 016 | Landsteiner-Wiener | LW | LW | 19p13.2—cen |
| 017 | Chido/Rogers | CH/RG | C4A, C4B | 6p21.3 |
| 018 | Hh | H | FUT1 | 19q13 |
| 019 | Kx | XK | XK | Xp21.1 |
| 020 | Gerbich | GE | GYPC | 2q14—q21 |
| 021 | Cromer | CROM | DAF | 1q32 |
| 022 | Knops | KN | CR1 | 1q32 |
| 023 | Indian | IN | CD44 | 11p13 |
Система группы крови AB0
Групповая принадлежность по системе AB0
По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.
Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.
В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A1 и A2. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld. Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A1 и A2. A2 встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A2 может содержать анти-A1-антитела: в 2 % случаев в группе A2 и в 30 % в A2B. Антитела анти-A1 представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.
Методика определения групп крови A2 и A2B
Частота выявления эритроцитов A2 существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик типирования групп крови A2 и A2B.
| Число проанализированных образцов | Группа крови A (II) | Группа крови AB (IV) | ||
|---|---|---|---|---|
| Число проанализированных образцов | Группа A2 (II) в % | Число проанализированных образцов | Группа A2B (IV) в % | |
| Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин) | 1592 | 14,7 | 357 | 23,5 |
| Цоликлоны: анти-A, анти-AB | 3599 | 2,1* | 357 | 7,03* |
| Цоликлон анти-А — слабый | 3587 | 4,5* | 357 | 11,2* |
| Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки | 1592 | 17,4 | 344 | 34,2 |
Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.
Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.
В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A1 и A2. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.
Методика определения групп крови
Алгоритм выявления группы крови гемагглютинирующими сыворотоками
Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.
В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.
Техника определения группы крови цоликлонами
Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику типирования по системе AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.
Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.
Непрямой метод типирования: алгоритм действий
Методика определения основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.
При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.
Заключение о групповой принадлежности
| Результаты анализа плазмы со стандартными эритроцитами | Групповая принадлежность | ||
|---|---|---|---|
| 0(I) | A(II) | B(III) | |
| — | + | + | 0(I) |
| — | — | + | A(II) |
| — | + | — | B(III) |
| — | — | — | AB(IV) |
Система Резус
Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус. Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).
В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rhnull. Ген Xro в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rhnull не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.
Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: D u (слабый) и D partial (частичный). Иммунная система D u и D partial способна вырабатывать анти-D-антитела.
Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора. Эритроциты с D u слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей D u считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.
Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.
Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.
Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой. Обладают меньшим в сравнении с полными антителами молекулярным весом. Способны проходить через плаценту. Во время сенсибилизации сперва продуцируются полные антитела, далее в большей мере вырабатываются неполные (иммуноглобулины IgG) антитела.
Техника выявления резус-фактора с использованием цоликлона Анти-D-Супер
В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh+), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.
Методика определения резус-фактора D u в пробирочном тесте
Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.
Отсутствие результатов реакции с анти-D IgM и выраженная агглютинация с анти-D IgG свидетельствуют об обнаружении слабых форм антигена D. При слабо выраженной агглютинации следует повторить исследование в непрямой пробе Кумбса.
Определение резус-принадлежности стандартным универсальным реагентом
Стандартный реагент антирезус Rh0D содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Параллельно с анализом образца осуществляется контрольное исследование реагента Rh0D со стандартными резус-положительными (одногруппными или группы 0) и резус-отрицательными (одногруппными) эритроцитами.
Результат считается достоверным только после проверки контрольных образцов: наступлении реакции со стандартными резус-положительными и отсутствии реакции – с резус-отрицательными эритроцитами.
Информацию о пошаговой постановке непрямого теста Кумбса с использованием неполных анти-D-антител читайте в разделе сайта «Реакция Кумбса».
Правила забора биологического материала для иммунологических исследований
ГУЗ «Кемеровская областная клиническая больница»
Правила забора биологического материала
для иммунологических исследований
Н.Б. Миловидова – к.м.н. заведующая эпидемиологическим отделом ГУЗ КОКБ;
Е.Б. Лукоянычева–заведующая иммунологической лабораторией ГУЗ КОКБ.
© ГУЗ «Кемеровская областная клиническая больница», 2008г
Данное методическое пособие предназначено для медицинских сестер Кемеровской областной клинической больницы.
Методическое пособие поможет правильно произвести забор биологического материала и оформить сопроводительные документы.
Правильно произведенный забор биологического материала и правильно оформленные направления исключат ошибку на преаналитическом этапе исследования.
Формы сопроводительных документов составлены так, чтобы сократить время медицинской сестры, затрачиваемое на оформление направлений.
Необходимо, чтобы образцы крови были правильно взяты и вовремя доставлены в лабораторию. Нарушения, допущенные на преаналитическом этапе, могут повлиять на результат исследования и его дальнейшую интерпретацию.
Раздел 1.
Общие правила забора биологического материала и оформления сопроводительных документов
Перед забором крови пациенту следует сообщить:
1. На какой вид исследования будет проводиться забор крови.
2. Требования необходимые для данного исследования.
Порядок забора венозной крови
1. Исследование проводится утром натощак, последний прием пищи за 12 часов до взятия крови.
2. Исключение приема алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия крови.
3. Утренний прием лекарственных препаратов, лечебно-диагностических процедур (массаж, ЭКГ, физиотерапевческое лечение и др.) проводится после взятия крови.
5. Пациент перед процедурой должен находиться в покое, сидеть или лежать не менее 5 минут.
6. Продолжительность пережатия сосудов жгутом должна составлять не более 1 минуты.
7. Нельзя просить работать пациента кулаком и массировать предплечье по ходу вен.
Раздел 2
Технология забора крови из периферической вены для лабораторного исследования
подготовить на манипуляционном столе стандартный набор для забора крови из периферической вены, проверив целостность упаковок и сроки годности:
1. лоток для использованных материалов;
2. пробирки для крови;
3. упаковка с 2-мя стерильными салфетками (5х5см) или 4-5 шариками;
5. кожный спиртовой антисептик во флаконе с дозатором;
сделать необходимые надписи на пробирках;
оформить сопроводительные документы в лабораторию;
обеспечить удобное освещение;
помочь пациенту найти удобное положение;
разъяснить пациенту суть предстоящей процедуры, создавая атмосферу доверия, предоставляя возможность задать вопросы;
обработать руки спиртовым антисептиком;
вскрыть упаковки со стерильными материалами;
руку больного уложить в положении максимального разгибания, для чего под руку следует положить валик, имеющий влагостойкое покрытие.
выбрать вену для венепункции;
обработать место венепункции кожным антисептиком и дать высохнуть самостоятельно;
Не пальпируйте вену повторно!
надеть на стерильный шприц иглу;
снять с иглы защитный колпачок;
пальцами левой руки фиксировать кожу над веной;
ввести под кожу иглу срезом вверх под углом 30-40 0 ;
установить иглу параллельно вене и быстрым движением проколоть ее стенку;
иглу продвинуть немного вверх по длине вены;
набрать необходимое количество крови в шприц
— запрещается забор крови свободным кровотоком из иглы в пробирку, а также присоединение к игле нового шприца;
— для безопасного забора крови предпочтительно использовать вакуумный шприц-контейнер.
иглу извлечь из вены;
прижать место венепункции стерильной салфеткой на 2-3 минуты;
осторожно, предупреждая разбрызгивание крови, вылить содержимое шприца через иглу в одну или несколько пробирок.
набрать из емкости «Для дезинфекции инструментов» дезинфицирующий раствор через иглу в шприц;
вставить иглу в специальное отверстие контейнера «Для дезинфекции режущего и колющего инструментария» и, повернув ее, отделить от шприца и оставить в нем в растворе дезинфектанта;
Раздел 3
Правила взятия венозной крови с помощью закрытой системы (вакуумного шприца-контейнера)
полностью исключается контакт медперсонала с кровью на всех этапах взятия крови и ее транспортировки;
особо прочный пластик закрытых систем позволяет осуществить безопасную доставку крови на любые расстояния;
благодаря наличию широкого спектра пробирок с заранее добавленными реагентами для различных видов анализов (ЭДТА для гематологии, цитрат натрия для коагулогии, активатор свертывания для получения сыворотки), значительно облегчается работа медсестер и лаборатории. Международная цветовая маркировка предотвращает их не правильное применение;
уменьшается количество ошибочных анализов, связанных с неправильным взятием проб крови и неверным соотношением реагентов.
закручивающаяся крышка предотвращает «аэрозольный эффект» при открывании;
1. Надеть иглу на контейнер и закрепить легким поворотом по часовой стрелке. Провести пункцию вены.
1. Провести пункцию вены иглой. Благодаря защитной мембране кровь из иглы не вытекает.
2. Медленно оттягивая поршень, наполнить контейнер кровью. После заполнения кровью контейнер вместе с иглой вынуть из вены. Поршень зафиксировать в конечном положении до характерного щелчка. В случае взятия нескольких образцов крови, контейнер отсоединить. Иглу оставить в вене и на нее надеть следующий контейнер.
2. Создать вакуум в контейнере.
Для этого отвести поршень в конечное положение (до характерного щелчка) и отломить его
3. По окончании взятия крови, шток поршня обломить. Вы получаете транспортный контейнер с кровью и антикоагулянтом или готовую пробирку для сепарации сыворотки.
3. Насадить контейнер на иглу. Взятие крови осуществляется под действием вакуума. В этом случае вы также получаете транспортный контейнер с кровью и антикоагулянтом или готовую пробирку для сепарации сыворотки.
Транспортировка образцов крови
Транспортировка образцов крови должна осуществляться при комнатной температуре (18-25 град. C). Избегайте замораживания или перегревания образцов, так как нарушение температурного режима может повлиять на результаты. После забора крови образцы должны быть доставлены в лабораторию как можно скорее. При транспортировке образцы должны находиться в вертикальном положении.
При транспортировке образца внутри лечебно-диагностического учреждения, пробирки с кровью должны находиться в контейнере, который в случае повреждения пробирки будет предотвращать разлитие крови.
Порядок доставки крови в лаборатории
наружные части контейнера двукратно с интервалом в 15 минут протереть дезинфицирующим средством (концентрация по режиму для вирусных гепатитов);
доставить контейнер в лабораторию;
вынимать образцы крови из контейнера только в перчатках!
после возвращения из лаборатории контейнер вновь двукратно с интервалом в 15 минут протереть дезинфицирующим средством (концентрация по режиму, предусмотренному для гемоконтактных вирусных гепатитов).
Требование к маркировке пробирок.
Маркировку пробирок и заполнение сопроводительных документов следует проводить аккуратно и четко.
Фамилию, имя, отчество пациента писать четко и разборчиво.
В направлении заполнять все графы.
Не допускается, чтобы этикетка на пробирке была размыта, порвана или плохо приклеена.
Направления заполнять в соответствии с приложениями № 1-12