в какую пробирку кровь на гепатит цвет
Определение РНК вируса гепатита C (Hepatitis C virus) в крови методом ПЦР, количественное исследование
Краткое описание:
Эффективность лечения оценивается по количеству РНК до и во время терапии. Обычно вирусная нагрузка крови снижается в несколько раз за первые три месяца успешного лечения. При эффективной терапии виремия уменьшается на два порядка в первые 4-12 недель лечения и после окончания курса терапии генетический материал вируса в крови не обнаруживается. Отсутствие снижения виремии через 12 недель с начала лечения указывает на его неэффективность. Рекомендовано проводить анализ до начала терапии, на 4-й, 12-й и 24-й неделях лечения и через 24 недели после окончания курса. Длительность терапии и периодичность количественного определения РНК вируса гепатита С зависит от генотипа вируса и степени повреждения печени.
Синонимы (rus):Вирус гепатита С (ВГС), количественное определение РНК.
Синонимы (eng): Hepatitis C Virus RNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood, HCV Viral Load, Hepatitis C Virus RNA Quant.
Метод исследования: Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени.
Единца измерения: копии/мл, МЕ/мл
Подготовка к исследованию:
• Не принимать пищу в течение 12 часов перед анализом.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.
Тип биоматериала: Венозная кровь
Тип пробирки: вакуумные пробирки с К3ЭДТА (цвет крышки: сиреневая)
Цена услуги: 1346 руб.
Срок выполнения: 4 рабочих дня,понедельник, четверг
Что означают результаты:
• Не обнаружено – РНК вируса гепатита С не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (1200 копий/мл = 300 МЕ/мл).
• 2*10^6 копий/мл (>8*10^5 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена. Высокая виремия.
• >100 000 000 копий/мл (>25 000 000 МЕ/мл) – РНК вируса гепатита С обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.
Что может влиять на результат?
Недостоверный результат может быть получен при:
• загрязнении биоматериала;
• наличии в образце ингибиторов – химических и белковых субстанций, влияющих на различные компоненты ПЦР;
• присутствии в крови гепарина.
Важные замечания:
• Уровень вирусной нагрузки крови не указывает на степень повреждения печени и тяжесть заболевания. Для их оценки необходимо исследовать биохимические показатели и материалы биопсии.
• При планировании лечения очень важно определить генотип вируса гепатита С.
Для «больницы» и на «всякий случай»: анализы на гепатиты B и С
Какие анализы нужны для госпитализации и «после контакта»? Что делать, если первичные анализы пришли положительными? И как правильно проверять уровень антител после вакцинации от гепатита В?
«Вирусные следы»
Диагностика вирусных гепатитов (чаще B и С) для некоторых пациентов может показаться тем еще квестом.
Все дело в том, что выявление первичных маркеров этих инфекций, используемых для госпитализации или планового скрининга, не всегда означают «катастрофу» для сдавшего анализ.
1. Так, к примеру, положительный анализ крови на HBs-антиген (= поверхностный, австралийский) гепатита В может означать:
Кроме того, в некоторых случаях, например, у беременных, анализ может оказаться и ложно положительным, придя в норму спустя некоторые время. Причем какого-либо научного объяснения этому явлению на сегодняшний день еще не найдено.
Если же требуется оценить степень напряженности иммунитета к вирусу после вакцинации, а также подтвердить ее наличие, в случае утери «прививочного паспорта», нужен уже не сам HBs-антиген, а антитела к нему (anti-HBs).
2. В случае гепатита С, положительный анализ на суммарные (IgG + IgM) антитела (anti-HCV) также имеет место не только в случае острого процесса, но и в случае хронического заболевания. А также, если имело место спонтанное самоизлечения от вируса в прошлом, а антитела остались в память о встрече с инфекцией
Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, это явление наблюдается примерно у 30% инфицированных. При этом антитела IgG в крови, разумеется, остаются надолго или пожизненно и могут «серьезно напугать» не знающего о них носителя.
Оба скрининговых маркера (HBs-антиген и anti-НCV) прекрасно подходят и для «самопроверки» после подозрительного, в отношении гепатитов, контакта. Однако для достижения максимальной достоверности результата, анализы надо сдавать с учетом:
анализ рекомендуется сдавать трижды – через 1, 3 и 6 месяцев от вероятного «дня» заражения.
Дополнительные «подсказки»
Получение положительного первичного анализа на гепатит В или С потребует ряда дополнительных исследований для определения активности процесса, тактики лечения (или наблюдения), а также степени «заразности» для окружающих.
В частности, для гепатита В потребуется сдать кровь на:
отражающие не только активность инфекционного процесса, но и «заразность» для окружающих.
Если же положительным пришел первичный анализ на гепатит С, то дополнительно потребуется сдать:
ПЦР-исследование (качественное или количественное при назначении лечения.
А, в дальнейшем, при необходимости врач может назначить генотипирование вируса, поскольку разные его типы проявляют разную степень агрессии к печеночным клеткам и чувствительность к лекарственным средствам.
При этом, стоит помнить, что количественный «формат» генотипирования вируса и «обычный» ПЦР-«подсчет» вирусных частиц – вовсе не одно и тоже, и не могут заменить друг друга.
В какую пробирку кровь на гепатит цвет
Мы проводим исследования крови на:
Преаналитический этап
При исследовании на инфекционные маркеры необходимо соблюдать все правила преаналитического этапа, который включает в себя комплекс мероприятий, выполняемых от назначения на инфекционные маркеры до осуществления лабораторных измерений взятого биоматериала.
Преаналитический этап-это условия, в которых находится пациент перед взятием у него биоматериала, его первичной обработки, хранения и доставки в лабораторию. Соблюдение правильного проведения преаналитического этапа важно, так как до 60% погрешностей в КДЛ по России приходится на преаналитический этап.
Преаналитический этап включает:
Образец крови для теста на ВИЧ должен забирать квалифицированный сотрудник с применением во всех случаях «универсальных мер предосторожности» против случайной передачи вируса.
При исследовании в цельной крови, сыворотке или плазме образец крови берут чаще всего из локтевой вены. При плановом назначении лабораторного теста кровь для его выполнения следует брать натощак (после примерно 12ч. голодания и воздержания от приема алкоголя и курения), при минимальной физической активности непосредственно перед взятием (в течение 20-30 мин), в положение пациента лежа или сидя.
Взятие венозной крови облегчается применением вакуумных пробирок. Под влиянием вакуума кровь из вены быстро поступает в пробирку, что упрощает процедуру взятия и сокращает время наложения жгута.
В зависимости от назначенного вида исследования образец крови должен собираться при наличии строго определённых добавок. Для получения плазмы кровь собирают с добавлением антикоагулянтов: этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), цитрата, оксалата, гепарина. Для исследований системы свертывания крови применяется только цитратная плазма. В большинстве гематологических исследований используют венозную кровь с солями этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, К2 или К3-ЭДТА). Взятие биоматериала для иммуносупрессантов (такролимус и циклоспорин) проводят в пробирке с ЭДТА, К2 до верхней метки, содержимое пробирки незамедлительно, с осторожным переворачиванием 5-10 раз, перемешать.
Для предупреждения контаминации (механический перенос инфекционного агента из одного образца в другой) необходимо строго соблюдать правила забора биоматериала и его транспортировки.
Доставка в лабораторию материала для исследования осуществляется в контейнерах, биксах или сумках-холодильниках. Доставляемые емкости с жидкими материалами должны быть закрыты пробками, исключающими выливание содержимого во время транспортировки. Дно контейнеров содержащих емкости с ПБА (микроорганизмы 3,4 групп патогенности), должно быть покрыто адсорбирующим материалом, контейнера, биксы или сумки-холодильники должны быть промаркированы и иметь международный знак «Биологическая опасность».
Доставка образцов крови происходит с соблюдением всех этапов холодовой цепи. Холодовая цепь – это соблюдение температурного режима от момента взятия биоматериала до лабораторного тестирования.
Несоблюдение правил преаналитического этапа приводит к возникновению неспецифических реакций.
Общие правила по подготовке к исследованиям на ВИЧ-инфекцию, вирусный гепатит В (HbSAg), вирусный гепатит С, сифилис.
Вич-инфекция
К антигенам вируса, расположенным на поверхности клеток, вырабатываются антитела, которые используются для диагностики инфекции. В настоящее время известны 2 типа вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Считают, что ВИЧ-2 имеет меньшую способность к распространению и медленнее разрушает иммунную систему.
Источником ВИЧ-инфекции является человек. Почти во всех биологических жидкостях инфицированного человеческого организма (кровь, сперма, грудное молоко, влагалищный и цервикальный секрет) в различной концентрации обнаруживаются вирусные частицы.
В терминальной стадии СПИД количество антител может значительно снижаться, вплоть до полного их исчезновения. Серологическая диагностика инфекции ВИЧ на первом этапе строится на выявлении суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с помощью твердофазного анализа. На втором этапе методом иммунного блотинга проводится определение антител к отдельным белкам вируса.
Гепатит С
Высокая степень генетической изменчивости ВГС способствует «ускользанию» вируса из-под иммунного ответа. С этим связаны трудности в лабораторной диагностике (серонегативный гепатит С).
Источниками ВГС являются больные всеми формами острого и хронического гепатита С. Вирус попадает в кровь при любых парентеральных манипуляциях: гемотрансфузии, инъекциях, при посещении стоматолога и гинеколога, оперативных вмешательствах, зондовом обследовании и т.д. К группе риска относятся больные, находящиеся на гемодиализе, страдающие гемофилией и другими заболеваниями крови, получающие плазму, гемоконцентраты, иммуноглобулины. Наркоманы, употребляющие наркотики внутривенно. Медицинские работники, имеющие контакт с кровью. Относительно меньшее значение имеют половой, бытовой и вертикальный пути передачи, что связано с низкой виремией ВГС.
Инкубационный период длится в среднем 6-8 недель с возможными колебаниями от 2-4-х недель до 4-6 месяцев больше. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз (превышают норму в 5-30раз). Сероконверсия наступает через 15-20 недель от момента заражения. На 3-4 недели раньше анти-ВГС-IgG обнаруживается анти-ВГС-IgM. РНК вируса с помощью ПЦР определяется через 1-3 недели после инфицирования.
Лабораторная диагностика гепатита С основана на обнаружении в образцах сывороток крови человека специфических маркеров вируса гепатита С: антител к антигенам ВГС, относящихся к иммуноглобулинам классов G и M, а так же нуклеиновой кислоты возбудителя (РНК ВГС).
Гепатит В
Вирусный гепатит В- инфекционное заболевание, которое характеризуется тяжелым воспалительным поражением печени. Источниками возбудителя инфекции являются больные острыми и хроническими формами болезни, а также лица с субклиническим течением инфекционного процесса и здоровые носители.
ГВ передается через кровь и контактным, преимущественно половым путем. Большому риску подвергаются медики, имеющие контакты с кровью. Вирус может передаваться от матери к ребенку во время беременности или непосредственно при родах.
Лабораторная диагностика ГВ основана на выявлении специфических для ГВ антигенов и соответствующих антител в крови, а также вирусных нуклеиновых кислот, основными из которых являются:
В диагностике ГВ наиболее широко используется определение HBsAg. HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В, основной маркер острого и хронического гепатита В- представляет собой белковую молекулу, ответственную за адсорбцию вируса на поверхности гепатоцитов. После встраивания вируса в геном печеночных клеток они начинают продуцировать вирусную ДНК и белки, и новые молекулы HBsAg поступают в кровь.
Данный антиген выявляется как при остром, так и при хроническом заболевании. При остром ГВ поверхностный антиген вируса обнаруживается через 3-5 недель от момента инфицирования, то есть задолго до появления клинических признаков болезни и в этих случаях является единственным серологическим маркером.
Сифилис
Сифилис – хроническое инфекционное заболевание, вызываемое Treponemapallidum (бледная трепонема), характеризуется полиорганным поражением и стадийным течением.
Диагноз сифилиса должен быть подтвержден лабораторными исследованиями, однако, при отрицательном результате скринингового теста обследование пациента с существующим риском недавнего заражения сифилисом следует повторить через 1-2 недели. Образцы, давшие положительный результат в тест-системе для выявления суммарных антител, необходимо проанализировать в системах, выявляющих конкретные классы иммуноглобулинов(JgG и IgM). Положительный результат на JgG и IgM является подтверждением положительного результата, полученного в скрининговом тесте, и свидетельствует о наличии специфических антитрепонемных антител.
О взятии, хранении и транспортировке материала для исследования на ВИЧ-инфекцию и СПИД – индикаторные заболевания
Наиболее частыми нарушениями указанных правил являются следующие:
1) при оформлении сопроводительной документации не указывается наименование диагностической тест-системы, ее серия, срок годности
2) не полностью указываются паспортные данные обследуемых, а также дата и место взятия материала
3) зачастую в лабораторию ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ доставляется материал, уже непригодный для исследования: сыворотки, хранившиеся дольше установленного срока хранения (для разных методов исследования сроки хранения составляют от 3 до 48 часов); проросшие, гемолизированные сыворотки, в недостаточном для исследования количестве (в зависимости от метода минимально необходимый объем материала составляет от 2 до 5 мл);
4) номера, проставленные на флаконах, не соответствуют указанным в направлении; количество проб крови не соответствует количеству, указанному в направлении;
5) неправильно производится взятие материала, в пробах крови, доставляемых для исследований методом ПЦР и для иммунологические исследований, обнаруживаются сгустки,
6) при заборе материала не всегда медицинский персонал ЛПУ обращает внимание на сроки годности пробирок.
Правила взятия и доставки крови для проведения лабораторных исследований методом ИФА на ВИЧ-инфекцию и СПИД-индикаторные заболевания.
Взятие крови производится из локтевой вены в чистую сухую пробирку в количестве 3-5 мл. У новорожденных можно брать пуповинную кровь с указанием об этом в направлении. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при +4-8 0С. Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. В случае невозможности доставки материала в течение суток следует сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку. Сыворотка отделяется центрифугированием. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер, и в таком виде она может храниться до 7 дней при температуре +4-8 0С. На пробирке следует указать порядковый номер, фамилию и инициалы пациента, в строгом соответствии с направлением. Для транспортировки в КДЛ диагностики ВИЧ штативы с пробирками помещают в термоконтейнер, легко подвергающийся дезинфекции. Полученный материал в КДЛ диагностики ВИЧ доставляет медицинский персонал, прошедший специальный инструктаж в установленном порядке.
Обменный журнал и направление оформляются строго по форме №264/у-88 разборчивым почерком, с четким указанием на какие виды исследований направляется материал; зачеркивать, вносить в направление изменения, поправки категорически запрещено! Обменный журнал и направление помещают в полиэтиленовый пакет и доставляют вместе с образцами крови. При доставке сыворотки по запросу ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ в сопроводительных документах необходимо выделять такие образцы пометкой «ПОВТОР», при невозможности взятия второй порции сообщить письменно (!).
Утв. МЗ СССР от 05.09.1988 г. №690
Направление №__________________
на исследование образца крови в ИФА на ВИЧ-инфекцию
В_________________________________________________________
(наименование учреждения)
Должность лица, направляющего материал___________________________________
Дата «________» _________________________________200__ года.
Взятие материала для исследования производить только при предъявлении пациентами паспорта или иного документа, удостоверяющего его личность (кроме анонимного обследования).
Коды контингентов
Наименование кода
Доноры (крови, биологических жидкостей, органов и тканей)
Гомо- и бисексуалисты
Больные заболеваниями, передающимися половым путем
Лица, находящиеся в местах лишения свободы
Обследованные по клиническим показаниям
Беременные (доноры плацентарной и абортной крови)
Обследованные при эпидемиологическом расследовании
Для лабораторий диагностики ВИЧ-инфекции в обменном журнале и направлении обязательно дополнительно указываются результаты исследования (ОП сыворотки, ОП критическое), а также дата постановки, название, серия, срок годности используемой тест-системы.
Правила взятия, хранения и доставки материала для проведения исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Для проведения ПЦР для определения уровня РНК ВИЧ (количественный анализ – вирусная нагрузка!) используется плазма крови. Взятие крови проводится утром натощак в пробирку типа Vacuette ® с маркировкой «ЭДТА-К3» (с сиреневой крышкой), в количестве не менее 5 мл.Крышку пробирки не открывать! П робирку с кровью сразу после забора материала несколько раз переворачивают для перемешивания с консервантом. Хранить взятый материал при температуре 2-8 0С не более 6 часов. Обеспечить доставку материала в клинико-диагностическую лабораторию ГБУЗ РЦПБ со СПИДом и ИЗ в течение 4 часов с момента взятия. В контейнер для доставки материала вложить хладоэлемент.
В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, точное время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.
Правила взятия и доставки материала для проведения иммунологических исследований.
Взятие крови для проведения иммунологических исследований методом проточной цитометрии ( CD 4, CD 8, CD 4/ CD 8) производится натощак из локтевой вены в пробирку типа Vacuette ® с маркировкой «ЭДТА-К3» (с сиреневой крышкой), в количестве не менее 3 мл.Крышку пробирки не открывать! П робирку с кровью сразу после забора материала несколько раз переворачивают для перемешивания с консервантом. Хранить взятый материал при температуре 15-25 0С (взятый материал не охлаждать!) не более 24 часов. Обеспечить доставку материала в клинико-диагностическую лабораторию ГБУЗ РЦПБ со СПИДом и ИЗ в течение 30 часов с момента взятия. В контейнер для доставки материала хладоэлемент не класть!
Материал должен быть доставлен в лабораторию сразу после взятия. Недопустимо замораживание биологического материала. Флаконы должны быть четко промаркированы с указанием фамилии пациента, даты и времени взятия. Маркировка флаконов должна строго соответствовать данным, указанным в направлении.
В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.
Цветовая кодировка вакуумных пробирок VACUETTE
Цветовая кодировка вакуумных пробирок VACUETTE
В современном мире все больше внимания уделяется лабораторным исследованиям и качеству их проведения.
На что больше всего обращает внимания любой человек, увидевший пробирку? Яркий цвет колпачка! Это не просто дизайнерское решение, это удобство медсестер и лаборантов. Данные требования отражены в ГОСТ ISO 6710-2011 «Контейнеры для сбора образцов венозной крови одноразовые. Технические требования и методы испытаний» и ГОСТ Р 53079.4-2008 «Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа».
Итак, что же означают эти яркие колпачки. Каждая пробирка имеет определенный реагент или же не имеет его, что тоже кодируется определенным цветом. Рассмотрим подробнее, каждый цвет и реагент.
1. Пробирка с голубой крышкой (с цитратом натрия).
В данной пробирке имеется забуференный раствор натрия цитрата в возможных процентных соотношениях 3,2 и 2,8. Этот тип пробирок используется для исследования системы гемостаза (коагулограмма). В данный тип исследования входят такие показатели, как: АЧТВ, протромбин, фибриноген, тромбиновое время и другие.
Также пробирки с голубой крышкой могут содержать в себе реагент CTAD. Настоящий реагент используется для тех же исследований, но его применяют при исследовании пациентов, получающих антикоагулянтную терапию. В состав реагента входит забуференный цитрат натрия, теофиллин, аденозин и дипиридамол.
2. Пробирка с красной крышкой (с диоксидом кремния и разделительным гелем).
Данные пробирки используют для исследования сыворотки крови. Сыворотка крови, в отличие от плазмы, не содержит фибриногена, следовательно, чтобы получить пробу сыворотки, нужно активировать процесс свертывания пробы.
В пробирках с красной крышкой происходит активация данного процесса за счет диоксида кремния (SiО2) нанесенного на внутренние стенки в виде микрочастиц. Помимо реагента, в пробирках данного типа может содержаться разделительный гель. Он создает надежный барьер между сгустком и сывороткой, что важно во время хранения и транспортировки пробы. Пробирки с активатором свертывания используют для исследований в: биохимии, иммунологии, микробиологии, серологии и другие.
3. Пробирка с зеленой крышкой (с гепарином).
В отличие от пробирок с красной крышкой, служат для получения плазмы.
В них должен содержаться реагент, блокирующий процесс свертывания. В пробирках с зелеными крышками содержится антикоагулянт гепарин (натрий гепарин, литий гепарин, аммоний гепарин). В пробирках этого типа, также может содержаться гель для большей стабильности образца. Он создает надежный барьер между плазмой и форменными элементами во время транспортировки. Пробирки с антикоагулянтом могут использоваться для таких исследований как: электролитный состав крови, газовый состав крови, содержание алкоголя в крови.
4. Пробирка с фиолетовой крышкой (ЭДТА).
Реагент, содержащийся в данных пробирках связывает ионы кальция и блокирует процесс свертывания. Реагент состоит из этилендиаминуксусной кислоты (ЭДТА). ЭДТА-к2 или ЭДТА-к3 нанесена на внутренние стенки пробирки. Эти пробирки переназначены для гематологических исследований (качественный и количественный состав крови). Для молекулярно-генетических исследований и определения вирусной нагрузки применяются пробирки с ЭДТА и разделительным гелем.
5. Пробирка с розовой крышкой (с апротинином и КЭДТА)
В данной пробирке содержится реагент КЭДТА и апротинин (устойчивый белок, выделенный из бычьих легких) – ингибитор тканевых и сывороточных протеолитических ферментов (трипсин, хемитрипсин, плазмин, калликреин). Этот реагент помогает стабилизировать нестабильные и проблемные аналиты (например, некоторые гормоны).
6. Пробирка с серой крышкой (с разными реагентами: лития гепарин и монойодацетат или натрия фторид и калия оксалат).
Специальные пробирки для исследования глюкозы с несколькими вариантами реагентов: монойодацетат и лития гепарин, натрия фторид и калия оксалат, натрия фторид и КзЭДТА. Благодаря тому, что реагент в своем составе содержит не только антикоагулянт, но и стабилизатор уровня глюкозы, проба может сохранять свою стабильность до 48 часов при комнатной температуре.
7. Пробирки с желтой крышкой (с лимонной кислотой, натрия цитратом, декстрозой).
8. Пробирки с черной крышкой (с цитратом натрия).
Используются для определения СОЭ и в составе реагента имеют 3,2% цитрат натрия.
Данный материал носит ознакомительный характер и не может использоваться в качестве обучающего.